Comment mesurer la concentration cellulaire ?

Comment mesurer la concentration cellulaire ?

La concentration cellulaire est un paramètre essentiel dans de nombreux domaines de la biologie. Elle permet de quantifier la densité des cellules dans une suspension ou un échantillon, et est utilisée dans des applications telles que la culture cellulaire, l’immunologie et la cytologie.

Méthode de comptage en chambre de comptage

La méthode de comptage en chambre de comptage est une technique couramment utilisée pour mesurer la concentration cellulaire. Elle implique l’utilisation d’une chambre de comptage, qui est un dispositif contenant une grille avec des carrés de taille connue.

Étapes de la procédure :

1. Préparer une suspension cellulaire : Prélevez un échantillon de la suspension cellulaire et diluez-le dans une solution appropriée (par exemple, du milieu de culture ou du PBS) pour obtenir une densité cellulaire appropriée pour le comptage.

2. Charger la chambre de comptage : Introduisez un petit volume de la suspension cellulaire diluée dans la chambre de comptage.

3. Laisser reposer : Laissez reposer la chambre de comptage pendant quelques minutes pour permettre aux cellules de se déposer sur la grille.

4. Compter les cellules viables : À l’aide d’un microscope, comptez le nombre de cellules viables (celles qui ne sont pas mortes ou endommagées) dans plusieurs carrés de la grille.

5. Calculer la concentration cellulaire :

   • Concentration cellulaire dans le carré compté : Divisez le nombre de cellules comptées par le volume du carré (qui est généralement connu).
   • Concentration cellulaire dans la suspension d’origine : Multipliez la concentration cellulaire dans le carré compté par le facteur de dilution et par 10^4 (pour tenir compte du volume total de la suspension).

Calcul du nombre total de cellules viables

Une fois la concentration cellulaire déterminée, le nombre total de cellules viables dans la suspension peut être calculé en multipliant la concentration par le volume total de la suspension.

Conseils

• Utilisez des échantillons correctement dilués pour éviter le surpeuplement ou le sous-peuplement de la chambre de comptage.
• Comptez les cellules dans plusieurs carrés pour obtenir une moyenne plus précise.
• Utilisez des colorants d’exclusion, tels que le bleu de trypan, pour distinguer les cellules viables des cellules mortes.
• Étalonnez régulièrement la chambre de comptage pour garantir l’exactitude des mesures.

En suivant ces étapes, vous pouvez mesurer avec précision la concentration cellulaire, un paramètre essentiel pour diverses applications biologiques.